細(xì)胞培養(yǎng)（cell culture）技術(shù)是指選用各種細(xì)胞的生存條件對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)和研究的技術(shù)，是廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)領(lǐng)域的重要技術(shù)。
復(fù)蘇
1.把凍存管從液氮中取出來(lái)，立即投入37℃水浴鍋中，輕微搖動(dòng)。液體都融化后(大概1-1.5分鐘)，拿出來(lái)噴點(diǎn)酒精放到超凈工作臺(tái)里。
2.把上述細(xì)胞懸液吸到裝10ml培養(yǎng)基的15ml的離心管中(用培養(yǎng)基把凍存管洗一遍，把粘在壁上的細(xì)胞都洗下來(lái))，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
3.把上清液倒掉，加1ml培養(yǎng)基把細(xì)胞懸浮起來(lái)。吸到裝有10ml培養(yǎng)基的10cm培養(yǎng)皿中前后左右輕輕搖動(dòng)，使培養(yǎng)皿中的細(xì)胞均勻分布。
4.標(biāo)好細(xì)胞種類(lèi)和日期、培養(yǎng)人名字等，放到CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)胞貼壁后換培養(yǎng)基。
5.3天換一次培養(yǎng)基。
傳代
1.培養(yǎng)皿中的細(xì)胞覆蓋率達(dá)到80%-90%時(shí)要傳代。
2.把原有培養(yǎng)基吸掉。
3.加適當(dāng)?shù)囊鹊鞍酌?能覆蓋細(xì)胞就行)，消化1-2分鐘。
4.細(xì)胞都變圓后加如入等體積的含血清的培養(yǎng)基終止消化。
5.用移液槍吹打細(xì)胞，把細(xì)胞都懸浮起來(lái)。
6.把細(xì)胞吸到15ml的離心管中，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
7.倒掉上清液，加1-2ml培養(yǎng)基，把細(xì)胞都吹起來(lái)。
8.根據(jù)細(xì)胞種類(lèi)把細(xì)胞傳到幾個(gè)培養(yǎng)皿中。一般，癌細(xì)胞分5個(gè)，正常細(xì)胞傳3個(gè)。繼續(xù)培養(yǎng)。
凍存
把細(xì)胞消化下來(lái)并離心(同上)。用配好的凍存液把細(xì)胞懸浮起來(lái)，分裝到滅菌的凍存管中，靜止幾分鐘，寫(xiě)明細(xì)胞種類(lèi)，凍存日期。4℃30min，-20℃30min，-80℃過(guò)夜，然后放到液氮灌中保存。
凍存液的配制：70%的完全培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加，邊滴邊搖。

主要特征:

●二氧化碳培養(yǎng)箱采用流線型圓弧設(shè)計(jì)，外殼采用冷軋鋼板制造，表面靜電噴塑；內(nèi)膽均為優(yōu)質(zhì)不銹鋼材料制成，半圓形四角設(shè)計(jì)使清潔更方便。

●微電腦溫度控制器，溫度波動(dòng)小，箱內(nèi)裝有紫外線殺菌燈可定期對(duì)箱內(nèi)進(jìn)行紫外線消毒，從而更有防止細(xì)胞培養(yǎng)期間污染。

●二氧化碳培養(yǎng)箱采用門(mén)溫控可有效防止箱內(nèi)玻璃門(mén)結(jié)露現(xiàn)象。

●水套式配有微生物過(guò)濾器位于進(jìn)氣口，提供100%過(guò)濾氣體。

●配有二氧化碳培養(yǎng)箱減壓閥。（選配）

●二氧化碳培養(yǎng)箱設(shè)有獨(dú)立限溫報(bào)警系統(tǒng)，超過(guò)限制溫度即自動(dòng)中斷，保證實(shí)驗(yàn)安全運(yùn)行，不發(fā)生意外。（選配）

技術(shù)參數(shù):

 培養(yǎng)箱使用注意事項(xiàng)  

1、從培養(yǎng)箱取放物品前，用酒精清潔雙手（或手套），盡量縮短開(kāi)門(mén)時(shí)間和減少開(kāi)門(mén)次數(shù)。（注：培養(yǎng)箱中的空氣是經(jīng)過(guò)過(guò)濾的潔凈空氣。長(zhǎng)時(shí)間敞開(kāi)或頻繁開(kāi)關(guān)培養(yǎng)箱，容易造成污染。） 

2、從培養(yǎng)箱拿取細(xì)胞時(shí)輕拿輕放，動(dòng)作迅速，隨手關(guān)緊培養(yǎng)箱門(mén)。未經(jīng)允許，禁止翻看、移動(dòng)他人細(xì)胞或樣品，如有特殊需要的，請(qǐng)聯(lián)系實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人協(xié)調(diào)。 

3、培養(yǎng)瓶皿放入培養(yǎng)箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精揮發(fā)后再放入，以免培養(yǎng)箱內(nèi)滯留過(guò)多乙醇蒸氣。  

4、培養(yǎng)箱內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)的放置需整潔有序，方便查找，同時(shí)應(yīng)盡量提高培養(yǎng)箱的使用效率，負(fù)責(zé)人可視實(shí)驗(yàn)情況啟用或停止空培養(yǎng)箱的使用，節(jié)約資源。 

5、普通培養(yǎng)中的細(xì)胞，若非實(shí)驗(yàn)特殊需要，每瓶/板細(xì)胞每天只需要觀察生長(zhǎng)狀態(tài)一次，2人以上共用的細(xì)胞，可約好時(shí)間一起觀察。（注：頻繁將細(xì)胞拿出觀察，容易給培養(yǎng)箱造成污染，同時(shí)也會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)條件的恒定。）   

6、實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)經(jīng)常注意檢查培養(yǎng)箱溫度、CO2氣體量是否相符設(shè)定值。密切注意培養(yǎng)箱內(nèi)的增濕盤(pán)，定期更換無(wú)菌水并進(jìn)行消毒。密切注意培養(yǎng)箱內(nèi)情況，如出現(xiàn)霉變、菌斑、支原體和衣原體感染或其他明顯染菌跡象，應(yīng)立即通知管理員及其它使用者。